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Huygens 转盘共聚焦(Spinning Disk Confocal) 显微参数详解与实用操作手册(四)
来源: | 作者:上海伯业 | 发布时间: 2026-05-22 | 3 次浏览 | 🔊 点击朗读正文 ❚❚ | 分享到:

Part.6


反卷积参数

反卷积参数控制算法行为,不属于显微参数,而是调优参数。


6.1

PSF选择:理论PSF vs 实测PSF

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建议:对于转盘共聚焦,多数情况下使用理论 PSF 即可获得优秀的结果。如果追求极致精度且 RI 匹配良好,可使用 PSF Distiller 从 bead 图像中提取实测 PSF。


6.2

反卷积算法选择


CMLE — Classic Maximum Likelihood Estimation(经典最大似然估计)


 • 原理:迭代优化似然函数,使用 I-divergence(Csiszár 信息散度 / Kullback-Leibler 距离)作为质量准则,假设光子噪声服从泊松分布

 • 优势:精度最高,最适合低 SNR 图像

 • 劣势:速度较慢

 • GPU 加速:✅ 支持


✅ 详见: svi.nl/MaximumLikelihoodEstimation


GMLE — Good's Roughness Maximum Likelihood Estimation


 • 原理:在 MLE 基础上加入 Good 粗糙度惩罚项,改善对极高噪声图像的处理

 • 优势:对高噪声图像效果好;所需迭代次数比 CMLE 少 4 倍

 • 劣势:内存占用显著高于 CMLE 和 QMLE(大数据时可能成为瓶颈)

 • GPU 加速:✅ 支持

 • 版本要求:Huygens 14.10+


✅ 详见: svi.nl/GoodRoughnessMaximumLikelihoodEstimation


QMLE — Quick Maximum Likelihood Estimation


 • 原理:CMLE 的快速近似版本

 • 优势:比 CMLE 快约 5 倍(10 次 QMLE ≈ 50 次 CMLE)

 • 劣势:低 SNR 数据效果不如 CMLE

 • 最佳场景:高质量宽场图像和 3D 时间序列等计算密集型任务

 • 经验法则:当 SNR > 60 时,CMLE 最终会收敛到与 QMLE 相同的结果,但需更多迭代


✅ 详见: svi.nl/QuickMaximumLikelihoodEstimation


转盘共聚焦算法推荐

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✅ 详见: svi.nl/Deconvolution-Algorithms(推荐矩阵)


6.3

信噪比(SNR)


定义


在 Huygens 中,SNR 定义为图像最亮部分的光子数的平方根:

SNR = √P

其中 P 为图像最亮部分的光子数(基于泊松分布假设:误差 σ = √P,故 SNR = P/σ = √P)。

如果已知检测器转换因子 c(系统增益),则可直接从图像强度计算:

SNR = √(i_max × c)

其中 i_max 为最亮体素的强度值,c 为转换因子(单位:ADU⁻¹)。


✅ 详见: svi.nl/Signal-to-Noise-Ratio


⚠ SNR ≠ 背景!


噪声(Noise)不等于背景信号(Background)。SNR 不是信号除以背景(那是信背比 Signal-to-Background Ratio, SBR)。噪声描述的是真实信号周围的统计涨落,而背景是近似恒定的附加信号。

两者在 Huygens 中的处理方式也不同:SNR 在反卷积过程中使用,背景在反卷积结束后减除。


✅ 详见: svi.nl/Signal-to-Noise-Ratio("SNR is not background!")


噪声来源简述

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✅ 详见: svi.nl/Signal-to-Noise-Ratio


经验 SNR 参考值(SVI 官方)

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📝 转盘共聚焦注意:由于每个点的曝光时间短于点扫描共聚焦,转盘共聚焦图像的 SNR 通常偏低,多

数落在 5–20 范围内。

✅ 详见: svi.nl/Signal-to-Noise-Ratio


手动估算 SNR(高噪声图像)


1. 在 Slicer 中打开图像,设为 "slice" 模式

2. 放大到暗区域,查看单个像素

3. 找到单光子击中的强度值 i_single(暗区域中反复出现的最低非零值)

4. 查看图像最大像素值 i_max

5. 减去黑电平(如果 > 0)

6. 计算:SNR = √(i_max / i_single)


📝 此方法通常会低估 SNR。


Huygens 自动 SNR 估计


Huygens 会自动估计 SNR 并给出可靠性评分(poor / mediocre / good / very good)。此评分衡量的是估计的准确性,不是 SNR 的高低。如果可靠性为 poor,建议手动确定 SNR。

调优建议:不要为了调节结果锐度而修改 SNR——SNR 是图像的固有属性。请使用 Acuity 参数调节锐度。


6.4

Acuity(锐度参数)


版本要求:Huygens 21.10.1p0 及以上版本

Acuity 将"锐度调节"与"SNR 估计"解耦:

• SNR 保持为 Huygens 自动估计的真实值(图像的固有常数)

• 通过 Acuity 滑块调节结果锐度:向右更锐利,向左更平滑

• 每个通道和每个图像可独立设置


✅ 详见: svi.nl/Acuity("Since Huygens version 21.10.1p0, the acuity parameter is available in all deconvolution tools")


6.5

迭代次数(Number of Iterations)

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停止准则:Huygens 使用质量变化阈值(Quality Change Threshold)自动停止。当连续迭代间质量改善低于阈值(如 0.01)时停止。建议使用此自动停止准则。


✅ 详见:svi.nl/GoodRoughnessMaximumLikelihoodEstimation;svi.nl/QuickMaximumLikelihoodEstimation


6.6

背景估算(Background Estimation)

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💡 实用建议:对于批量处理(图像系列),推荐使用百分比(相对值)进行背景微调,以确保一致的背景校正。

背景在反卷积结束后被减除,与 SNR(在反卷积过程中使用)不同。

✅ 详见: svi.nl/BackGround



下期继续!!!!!



上海伯业产品








01


™Huygens 去卷积


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END










































  关于我们  


上海伯业是一家专注于高端科研仪器领域的高科技公司,主营业务聚焦于光学成像领域,公司致力于各类高端及定制化光学成像解决方案的推广和服务,涵盖超分辨成像、共聚焦成像、双光子成像、无标记成像、全玻片扫描成像、散射光谱成像、物理光谱仪器、科学相机等成像硬件,以及反卷积、多维图像处理、病理图像解析等多类科学图像分析软件。公司成立至今,已为众多顶级科研机构和企业提供高质量的技术支持与创新解决方案,广受用户认可。


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